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如何用酶标仪检测黄曲霉毒素B1
2020/7/16
 
  


黄曲霉毒素B1属于自然最强烈的致癌物质。 它一般产生于玉米,花生,巴西坚果和棉花种子中。 鉴于这种霉菌毒素的毒性,欧洲国家做出了相近的限量,对黄曲霉毒素B1的限量为2ppb,对黄曲霉毒素总量的限量为4ppb。


使用酶标仪能够快速而准确的检测谷物,饲料和其他食品中的黄曲霉毒素B1。






 


检测原理

黄曲霉毒素B1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。

(1)样品提取液或黄曲霉B1标准品100ul与酶联偶合物200ul,混合后取100ul,

(2)加入到抗体包被的微孔中等待15分钟,

(3)洗板去除未参加抗原-抗体反应的黄曲霉毒素B1,

(4)酶的底物100ul加入到微孔中,等待5分钟,颜色变为蓝色,颜色的深浅与黄曲霉毒素B1的含量成反比,

(5)加入终止液100ul,颜色变为黄色,


检测步骤

1.取固体或液体样品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混匀3分钟,静止10分钟,过滤,收集滤液,吸取100ul滤液加100ul分析缓冲液,混匀。

2.取出绿色的稀释孔和无色的有抗体包被的稀释孔各放入一个板架上。

3.吸取200ul酶联偶合物加入到绿色的稀释孔,再吸取100ul标样(0、2、5、20、50ppb),和100ul步骤1的待检混合样,混匀3次。

4.然后从300ul混合物中吸取100ul加入到无色的有抗体包被的稀释孔中,静止15分钟。

5.将孔中的液体倒掉,用蒸馏水冲洗每个孔,将微孔倒置于纸巾上把水吸干。

6. 加入100ul底物,放置5分钟,颜色变为蓝色。

7. 加入100ul终止液,颜色变为黄色。

8. 上机检测,(酶标仪滤镜450nm,示差滤镜630nm)

9. 稀释倍数f:1

10. 定量限:生奶0.002ug/kg,

11. 牛奶或花生酱≤20ug/kg,合格,

12. 计算公式:X= c*f


注:

1. 酶联偶合物25ml :sensitive conjugate 底物15ml :substrate 终止液15ml :stop solution 分析缓冲液 15ml :assay buffer

2. 试剂盒在使用前恢复到室温(18~30度),使用完毕后,放入2~8度冰箱冷藏

3. 标样中含有毒素,致癌性,使用时戴好橡胶手套、安全眼镜、工作服等防护装备

4. 在读数前,微孔中应没有气泡,否则影响分析结果

5. 标准曲线的相关系数 r ≥0.9850

6. 严格遵守规定的操作时间,否则导致数据不精确



 

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